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龙图腾网获悉南京启真基因工程有限公司申请的专利用于构建SOD1基因突变的ALS模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用获国家发明授权专利权，本发明授权专利权由国家知识产权局授予，授权公告号为：CN115232793B 。

龙图腾网通过国家知识产权局官网在2026-05-05发布的发明授权授权公告中获悉：该发明授权的专利申请号/专利号为：202110555953.4，技术领域涉及：C12N5/10；该发明授权用于构建SOD1基因突变的ALS模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用是由牛冬;汪滔;马翔;陶裴裴;刘瑜;曾为俊;王磊;程锐;黄彩云;赵泽英;段星;刘璐设计研发完成，并于2021-05-21向国家知识产权局提交的专利申请。

本用于构建SOD1基因突变的ALS模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用在说明书摘要公布了：本发明公开了用于构建SOD1基因突变的ALS模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用。本发明提供了一种制备重组细胞的方法：将SOD1‑gRNA1靶序列结合区如SEQIDNO：18中第3‑22位核苷酸所示、SOD1‑gRNA6靶序列结合区如SEQIDNO：19中第3‑22位核苷酸所示、SOD1‑mutant‑ss160SEQIDNO：20所示和NCN蛋白Cas9蛋白或具有Cas9蛋白的融合蛋白共转染猪细胞，得到重组细胞。本发明采用CRISPRCas9技术联合ssODN同源重组技术进行了SOD1基因的点突变基因编辑，模拟ALS的自然发病遗传特征，并获得了SOD1基因精确点突变的单细胞克隆，为后期通过体细胞核移植动物克隆技术培育ALS疾病模型猪奠定了基础。

本发明授权用于构建SOD1基因突变的ALS模型猪核移植供体细胞的基因编辑系统及其应用在权利要求书中公布了：1.一种制备重组细胞的方法，包括如下步骤：用SEQIDNO：20所示的DNA分子取代猪细胞的染色体DNA中SEQIDNO：21所示的DNA分子，得到重组细胞； 用SEQIDNO：20所示的DNA分子取代猪细胞的染色体DNA中SEQIDNO：21所示的DNA分子的实现方式为：将SOD1-gRNA1、SOD1-gRNA6、SOD1-mutant-ss160和NCN蛋白共转染猪细胞；所述SOD1-gRNA1为sgRNA，其靶序列结合区如SEQIDNO：18中第3-22位核苷酸所示；所述SOD1-gRNA6为sgRNA，其靶序列结合区如SEQIDNO：19中第3-22位核苷酸所示；所述SOD1-mutant-ss160为SEQIDNO：20所示的单链DNA分子； 所述NCN蛋白如SEQIDNO：3所示； 所述NCN蛋白的制备方法包括如下步骤： 1将质粒pKG-GE4导入大肠杆菌BL21DE3，得到重组菌； 2采用液体培养基37℃培养所述重组菌，然后加入IPTG并25℃诱导培养，然后收集菌体； 3将收集的菌体进行菌体破碎，收集粗蛋白溶液； 4采用亲和层析从所述粗蛋白溶液中纯化具有His6标签的融合蛋白； 5采用具有His6标签的肠激酶酶切具有His6标签的融合蛋白，然后采用Ni-NTA树脂去除具有His6标签的蛋白，得到纯化的NCN蛋白； 所述质粒pKG-GE4如SEQIDNO：1所示。

如需购买、转让、实施、许可或投资类似专利技术，可联系本专利的申请人或专利权人南京启真基因工程有限公司，其通讯地址为：211306 江苏省南京市高淳区经济开发区花山路17号6幢南京健康产业研究院3楼；或者联系龙图腾网官方客服，联系龙图腾网可拨打电话0551-65771310或微信搜索“龙图腾网”。

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